LPS造模实验指南：这些关键点一定要注意

LPS 是炎症、免疫和药效评价实验中最常用的造模试剂之一。无论是细胞炎症模型，还是小鼠急性炎症、内毒素血症、急性肺损伤等动物模型，LPS 都有广泛应用。想要获得稳定、可靠、可重复的数据，实验设计中的剂量、时间点、给药方式、批号和模型验证都非常关键。

使用 LPS 前，首先要明确模型类型。

• 如果是细胞实验，LPS 常用于刺激 RAW264.7、THP-1、BV2、BMDM 或原代巨噬细胞，观察炎症因子、NF-κB/MAPK 通路、iNOS、COX-2 等指标变化。

   

• 如果是动物实验，LPS 可用于建立急性炎症、内毒素血症、器官炎症损伤等模型。不同给药方式对应不同研究目的：

   

不同来源、不同厂家、不同批号的 LPS 活性可能存在一定的差异。实验中建议完整记录：来源菌株，如 E. coli O111:B4、O55:B5 等；厂家、货号和批号；配制溶剂；母液浓度；保存条件；冻融次数。

配制时通常可使用无菌 PBS、生理盐水或培养基。建议配制成较高浓度母液后分装保存，避免反复冻融。低浓度工作液尽量现配现用，使用前充分混匀。

同一批实验应尽量使用同一批号 LPS。如果更换批号，建议重新做小规模预实验。

以小鼠腹腔注射 LPS 诱导急性炎症模型为例，基本流程如下：

1. 选择合适品系、性别、年龄和体重范围的小鼠；

2. 适应性饲养 3–7 天；

3. 随机分组，设置 Control 组和 LPS 模型组；

4. 根据体重计算每只小鼠给药体积；

5. Control 组注射等体积 PBS 或生理盐水；

6. LPS 组按设定剂量给药；

7. 给药后观察动物状态；

8. 按预设时间点采血或取组织；

9. 检测炎症因子、组织损伤和相关信号通路。

LPS 剂量需根据模型目的优化。轻度炎症模型可从较低剂量开始探索；严重炎症或类脓毒症样模型则必须严格进行预实验和伦理评估。

细胞实验中，LPS 常用于诱导炎症反应。推荐流程如下：

1. 接种细胞，保证细胞状态良好；

2. 设置 Control 组、LPS 组和药物干预组；

3. 设置 LPS 浓度梯度；

4. 根据检测指标选择刺激时间；

5. 收集细胞或上清；

6. 检测 qPCR、ELISA、Western blot、NO 或免疫荧光等指标；

7. 同时检测细胞活力，排除细胞毒性干扰。

常用 LPS 浓度范围为 10 ng/mL–1 μg/mL。建议正式实验前设置浓度梯度。

常用刺激时间为 4–24 h。如果检测 NF-κB、MAPK 等早期信号，时间点可提前至 15–60 min；如果检测炎症因子 mRNA，常选择 4–6 h；如果检测上清炎症因子、iNOS、COX-2 或 NO，常选择 12–24 h。

模型是否成功，不能只看一个指标。

动物实验中可观察：

• 活动减少；

• 竖毛、蜷缩；

• 体温或体重变化；

• 血清 TNF-α、IL-6、IL-1β 升高；

• 组织炎症因子上调；

• HE 染色显示组织损伤或炎症细胞浸润。

细胞实验中可检测：

• Tnf、Il6、Il1b 等 mRNA 上调；

• TNF-α、IL-6 等分泌升高；

• iNOS、COX-2 表达增加；

• NF-κB p65 磷酸化或核转位增强；

• NO 释放增加。

多个层面的指标相互验证，结果才更可靠。

1. 剂量不能直接照搬文献

LPS 活性受来源、批号、动物品系、年龄、性别和给药方式影响。正式实验前建议做预实验。

2. 给药和取样时间要一致

LPS 诱导的炎症反应变化很快，不同时间点检测到的结果可能完全不同。

3. 细胞实验必须检测细胞活力

如果药物导致细胞死亡，炎症因子下降不一定代表抗炎作用。

4. 动物实验要设置伦理终点

高剂量 LPS 可能导致严重低体温、休克甚至死亡，应提前设定 humane endpoint，并加强观察。

5. 记录所有关键参数

包括 LPS 批号、浓度、冻融次数、给药剂量、给药体积、刺激时间和取样时间。

小结

LPS 是经典且高效的炎症造模工具，一个好的 LPS 模型，应当做到目的明确、剂量合适、时间点清楚、对照完整、指标可靠。对于细胞实验，建议先做浓度和时间梯度；对于动物实验，建议先做小规模预实验，避免直接使用高剂量方案。LPS 造模看似简单，真正决定结果质量的，往往正是这些实验细节。